酵罐的空气灭菌.接种技术

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并刻，然后迅速盖在接种孔上身疗紧、最后，终发酵罐的通气以及排气的手动阀门开大，在计算机上设定发酵初始通气量以及罐压，通过电动阀门控制发酵通气量以及罐压，便达到在

制要求，

(1)参数控制发酵过程中在线检测参数可通过计算机显示，通气量、pH、温度、搅

5.发酵过程的操作

养转速和臻压等许多多数，可按照控制软件的操作程序进行设定，只要调节机构在线，通过计算机控制调节机构而实现在线控制。

(2)建加控制一般况下，流加溶液主要有消沫剂、酸液或碱液、营养液(如碳源等)，流细前，将配制好的流加溶液装人流加瓶。用瓶盖或瓶塞密封好，用硅胶管把流瓶和不锈钢连接在一起，并用纱布、牛皮纸将不锈钢插针包扎好。置于灭菌锅内灭菌，直加时，在火焰区域内解开不锈钢插针的包扎，并将插针迅速插穿流加孔的硅胶塞。同时，将硅胶管装人蠕动泵的挤压轮中，启动蠕动泵，挤压轮转动可以将流加液压进发酵罐。通过计算机可以设定开始流加的时间、挤压轮的转速，从而可以自动流加以及自动控制流加速度。另，计算机可以显示任何时间的流加状态，如瞬时流量以及累计流量。

(3)取样操作发酵过程中，需定时取样进行一些理化指标的检测，如OD值、残糖浓度、产物浓等，取时，可调节罐底的三向阀门至取样位置，利用发酵罐内压力排出发酵液，用试管成烧杯接收，取样完毕，关闭三向阀门,打开与之连接的蒸汽，对取样口灭菌几分钟.

(4)放料操作发酵结束后，先停止搅,然后关闭发酵罐的排气阀门，调节罐底的三向阀门至放料位置，利用发酵罐内压力排出发酵液，用容器接收发酵液。

四、注意事项

1.发酵罐的清洗与维护

放料结束后，先关闭放料阀以及发酵罐进空气阀门，打开排气阀门排出罐内空气，使罐压为0。然后，拆卸安装在罐上的pH、DO等电极以及流加孔上的不锈钢插针，并在电极插孔和流加孔拧上不锈钢寨。接着，从接种孔加人70L左右的清水，启动搅拌，转速为100r/ mis左右，用蒸汽加热清水至121℃左右，搅拌30min左右，以此清洗发酵罐。清洗完毕，利用空气压力排出洗水，并用空气吹干发酵罐。

停用蒸汽时，切断蒸汽发生器的电源，通过发酵罐的各个蒸汽管道的排气阀排出残余蒸汽，直至蒸汽发生器上压力表显示为0。停用空气时，切断空气压缩机的电源，通过空气管算机

道的排气阀排出残条空气，直至贮气罐上压力表显示为0、最后，关闭所有的阀门以及计

2.蒸汽发生器的维护

用于蒸汽发生器的水必须经过软化、除杂等处理，以免蒸汽发生器加热管结垢，影响产生蒸汽的能力、使用时，必须保证供水，使水位达到规定高度，否则会出现“干管”现象造成损坏，蒸汽发生器的电气控制部分必须能够正常工作，达到设置压力时能够自动切断电源，蒸汽发生器上的安全阀与压力表须定期校对，能够正常工作。每次使用后，先切断电酸，排除压力后，停止供水，并将蒸汽发生器内的水排空。

五、考核内容与评定标准

1.相关知识

(1)发酵罐的结构有哪些?(20分)

项目七 发酵罐的使用及放大 145

(2)发酵罐怎样进行维护?(20分)

2.操作技能

(1)发酵罐的空气灭菌.(20分)(2)接种技术。(20分)(3)补料操作。(20分)

工作任务7-2 酵母菌的扩大培养

一、工作目标

(1)了解酵母菌生长代谢的基本规律，观察并记录酵母菌扩大培养过程及上罐发酵过程中菌种的生长变化情况。

(2)测定酵母发酵罐培养过程中还原糖、总糖、pH和酵母浓度的变化，并画出各自的变化曲线。

(3)分析测定酵母菌的生物效价及发酵活力。

二、材料用具

1.菌种面包酵母。

2.培养基 微课，微生物产品的发酵

(1)酵母斜面培养基10°P麦芽汁固体斜面，pH 5.0。

(2)酵母摇瓶种子培养基:10P麦芽汁，pH5.0，或葡萄糖10%，玉米浆1%，尿素

0.2%，pH 5.0。

(3)酵母分批发酵培养基玉米粉经液化、糖化，折合葡萄糖浓度为10%，玉米浆1%，硫酸铵 0.4%，pH 5.5。

(4)酵母分批补料发酵培养基补料培养基配比与分批发酵培养基相同。

3.实验仪器、设备

25L发酵罐;一套空气除菌系统;检查无菌用的肉汤培养基和装置;摇瓶机或摇床;超净工作台;离心机;显微镜;分光光度计;500mL三角瓶;接种铲;高压灭菌锅;总糖测定用手提糖量计;pH测定用pH计等。

三、工作过程

以下介绍发酵罐培养(分批培养)。

25L发酵罐装入15L发酵培养基，冷却至30℃，将培养好的摇瓶种子接入发酵罐(接种量2%~3%) 进行发酵，发酵条件为:28℃，搅拌转速400r/min，通风量1VVM。

(1)发酵罐培养基配制与灭菌基础料发酵一般按发酵罐容积的30%配制，如1L发酵罐配300ml培养基。25L发酵罐装人15L发酵培养基，发酵罐和培养基一起放进卧式高压灭菌器中121℃灭菌20min。

(2)接种与发酵

①接种 接种是在发酵罐顶部接种口进行。取生长良好的无杂菌污染的种子摇瓶培养液，适当降低通风量，在接种口四周缠绕上经酒精浸泡的脱脂棉，用火焰圈罩住发酵罐接种口，降低发酵罐进气压力，戴上石棉手套，迅速打开接种口，将冷却至30℃的培养好的摇瓶种子接入到发酵罐中，接种量为2%~3%，整个操作要连贯严谨。然后立即将接种口盖